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輔酶F420(F420)酶聯(lián)免疫分析試劑盒 本生
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:96T1.2ng/L-50ng/L
使用目的:本試劑盒用于測定微生物樣本中輔酶F420(F420)含量。
實(shí)驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中輔酶F420(F420)水平。用純化的輔酶F420(F420)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入輔酶F420(F420),再與HRP標記的輔酶F420(F420)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的輔酶F420(F420)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度(OD值),通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中輔酶F420(F420)濃度。
試劑盒組成
130倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液
6ml×1瓶2酶標試劑
6ml×1瓶8標準品(1600μg/mL)
0.5ml×1瓶3酶標包被板12孔×8條9標準品稀釋液
1.5ml×1瓶4樣品稀釋液
6ml×1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液
6ml×1瓶11封板膜2張 6顯色劑B液
6ml×1/瓶12密封袋1個(gè)
標本要求
1.標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡s快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?,用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。800μg/mL5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液400μg/mL4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液200μg/mL3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液100μg/mL2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液50μg/mL1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白孔調零,450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
操作程序總結:
計算 以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線(xiàn),根據樣品的OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實(shí)際濃度。
輔酶F420(F420)酶聯(lián)免疫分析試劑盒 本生 注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開(kāi)封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì )有結晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時(shí)做標準曲線(xiàn),最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期1.試劑盒保存:2-8℃。2.
有效期:6個(gè)月
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